胸腔（肺や心臓等が収まるところ）と腹腔（消化管、脾臓、泌尿器、生殖器等が収まるところ）を隔てる膜状の筋肉である。横隔膜が収縮・弛緩することにより、肺が膨らんだり縮んだりして、呼吸が行われる。なお、“しゃっくり”は、横隔膜が痙攣している状態をいう。
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